一篇文章帮您解决培养巨噬细胞所有的烦恼~

细胞 · 介绍

►   单核细胞及由单核细胞演变而来的具有吞噬功能的巨噬细胞，称为单核吞噬细胞系统。单核细胞发生于骨髓的多能干细胞，循环于血液中，穿透血管内皮进入组织内，转变为巨噬细胞。单核吞噬细胞系统在体内分布广，细胞数量多，主要分布于疏松结缔组织、肝、脾、淋巴结、骨髓、脑、肺以及腹膜等处，并依其所在组织的不同而有不同的名称。

►   单核吞噬细胞系统的细胞有很强的吞噬能力，能吞噬异物、细菌、衰老和突变的细胞等。此外，也吞噬抗原抗体复合物，并参与脂质与胆固醇代谢，可吞噬和蓄积脂质。吞噬的生理意义在于消除体内不需要的物质，其中巨噬细胞与淋巴细胞、粒细胞、肥大细胞，在功能上，有互相促进和互相抑制的作用。当单核吞噬细胞系的生理功能失调时，可引起多种疾病。

►   因此，巨噬细胞常被用来做相关研究。RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；在正常培养中，细胞会出现多边形和不规则形状，并伴有许多伪足的生成，细胞贴壁能力强。RAW 264.7细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。

RAW 264.7

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

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正常细胞形态：

刚接种半小时左右刚贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于培养皿中培养一段时间后一小片一小片的生长，片片不相连。

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异常细胞形态：

特点：

RAW264.7细胞极其容易出现伪足（长角）。需要及时观察细胞，若出现伪足则提示该传代了（可能是一天一传）。

当出现少量的伪足可正常传代，有少数分化的细胞是正常的，很难保证可以完全不分化。

分化的细胞：呈多角形，明显的体积变大，时常有较长的触角。

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培养的烦恼与解决：

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胰酶消化刺激RAW 264.7细胞严重分化

分化的RAW 264.7细胞

被胰酶消化过的RAW 264.7细胞表现出明显的分化现象呈多角形，有较长触角。

解决办法：刮取是比较合适的方法。把细胞培养液倒掉，加入37℃预温的PBS，然后刮细胞，食指和拇指夹紧细胞刮，细胞刮橡胶头刮面切面与平皿平行，用腕力轻轻刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切记只能刮一次，不要来回刮和反复刮，吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打。

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血清批间差刺激RAW 264.7细胞严重聚团

更换血清批次后严重聚团的RAW 264.7

原因推断：血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。RAW 264.7细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。

解决办法：先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。

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有分化的细胞说明细胞状态不好吗？

个别分化的RAW 264.7细胞

培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围。RAW264.7细胞生长速度快，2-3天即可传一代， 传代时间间隔超过3天很难吹下，每一次接种密度都要控制好。

解决办法：推荐传代比例为1:3-1:6；推荐传代时间：2-3天；推荐传代融合率：80%-90%。

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以下为培养不错的RAW 264.7细胞形态

RAW 264.7细胞

生长良好的RAW264.7 胞体边界感清晰，各个喂得圆鼓鼓、胖嘟嘟的，时刻准备着为人类生命科学研究而“献身”。

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听说热灭活的血清适合培养巨噬细胞？

最后为大家普及一条知识~

热灭活可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中，培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

热灭活时请将血清置于 56℃水浴30分钟。最好另加一个盛放与血清等体积水的烧杯并将温度计插入水中，以水中温度56℃为计时开始时间，加热过程中不时轻轻旋转混匀血清。

实验显示，对大多数的细胞而言，不需要使用热灭活血清。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进或完全没有作用，造成细胞生长速率降低。同时沉淀物会显著地增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察呈小黑点或絮状物，影响细胞观察。若非必须，不需要做热灭活处理。

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