一、目的规范用于微生物实验质量控制和操作评估的标准菌株管理与使用程序，尽量减少交叉污染确保实验结果可靠与实验室安全。二、范围本工作指引适用于微生物实验室所有标准菌株的管理与使用。三、参考四、内容4.1 程序1.标准菌株的复壮a.将复壮所用的0.5-1ml液体培养基（如TS或BPW）置于室温；b.将标准菌株从冰箱取出置于室温；c.无菌操作去除菌株的包装物；d.无菌操作敬液体培养基导入菌株容器；或者无菌操作剪开菌株包装物，将菌株倒入液体培养基；e.将试管在37℃下放置一段时间后，使菌种完全溶解到培养基中；f.轻轻摇动试管形成悬浮液；g. 从菌种悬浮液中接种几环到培养基平板（如营养琼脂）划线培养；h. 将接种过的平板置于合适的温度和条件下培养复壮。2. 从培养过的平板或斜面上挑取几个菌落，按照相应的LI接种到选择性培养基上。3. 将挑选出的菌落按照相应的LI进行菌种确认。进行革兰氏染色或者镜检，并纯化后按照相应的LI进行生化试验确认。记录下所有的现象。4. 在每年复壮或者买入是都要进行菌种确认实验。5. 菌种确认达到要求后，使用Microbank Frozen Beads标准储备菌株。a.取一定量的标准菌株培养物（18-24h），无菌操作接种到装有小珠的小瓶内并加入肉汤（BPW）。关紧小瓶并颠倒4-5次乳化培养物。不要剧烈摇晃，避免液体洒出；b.将多余的液体吸出。关紧小瓶；c.在小瓶上贴上标签，标明菌种名称和准备日期；d.小瓶在冷冻条件下（大约-20℃）可储存一年；e.从Microbank中准备工作菌株：从小瓶中无菌操作取出一个小珠，接种到非选择性培养基平板或斜面，或者放入液体培养基中。小珠从小瓶中取出后决不可以再放回。立即将小瓶放回冷冻；f. 接种过的平板、斜面或者肉汤放在37℃培养24-48h。一旦发现平板、斜面或者肉汤有微生物生长后立即从培养箱取出；g.在平板、斜面或者肉汤上粘贴标签，注明菌种名称、准备日期和有效期。放在冰箱大约4℃储存。6. 每次使用一支工作菌株，频率按照工作需要，通常为一个星期。一旦发现菌株有污染现象后立即处理掉并使用新的工作菌株。工作菌株在冰箱内保存不超过两个星期。7. 重复5-6步骤可更新工作菌株。8. 一旦标准菌株用完或者表现不满意时，重复1-4步骤更新标准菌株。4.2 储存1.采购回来的标准菌株需单独锁在-20℃的冰箱内。2.未使用的Microbank小珠放在小瓶内储存在4℃避免阳光直射。一旦发现Microbank有以下情况时不得使用：发现小瓶有泄露现象；储存液发现浑浊可能表示已经被污染；过了有效期。3. 所有的采购、复壮、使用和销毁必须记录并由主管确认。五、工作流程1.采购回的标准菌株可放在-20℃储存，直到过期。2. 使用Microbank Frozen Beads system 制备储存标准菌株。3.在小瓶上注明标准菌株的名称、准备日期和有效期。-20℃可保存一年。4.在平板/斜面/肉汤上注明标准菌株的名称、准备日期和有效期。依照需求使用，一旦发现菌株有污染现象后立即处理掉并使用新的工作菌株。