淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物（简称AET）处理的绵羊红细胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴细胞均能吸附AET-SRBC，形成牢固稳定而巨大的E-花环，较正常未处理的SRBC形成的E-花环百分比为高，而且形成快速，不易脱落，重复性好。再经淋巴细胞分层液分离时，AET-E花环易沉于管底，而未形成E-花环的T淋巴细胞，用低渗液解花环周围的 AET-SRBC，便可获得纯T淋巴细胞，而B淋巴细胞可直接取自分层液的界面。

新鲜豚鼠血Hanks液 小牛血清 199培养液 生理盐水 氯化钠溶液离心管 离心机

1.  AET-RRBC制备

1. 分离B细胞过程较长，为了避免B细胞自然死亡，在最后冲洗B细胞时可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。

2. 每次洗涤时，不要将试管底部液体吸干，即防止压积的B细胞接触空气。

3. 使用抗B淋巴细胞血清与受检细胞按NIH方法进行微量B细胞毒试验，使用倒置相差显微镜读数。

关于从小鼠脾脏中分离：

1.脾脏组织所含结缔组织比较少，可以直接在筛网上研磨，无需剪碎，也不用顾虑血管。

2.ficoll中含多聚糖，所以许多人喜欢把它放4度存放，是否室温对实验影响不大脾脏分离淋巴细胞实验比较简单，所以用普通的淋巴细胞分离液就行。

3 .离心2000rpm×20min，这步很关键，还有就是加细胞悬液时一定要贴壁缓慢加入，不要破坏分界面，分离液与细胞悬液我常用1：2，还有就是所选用的离心管粗细也会影响分层。

4.中间的悬浮白色环状细胞层即是所要的淋巴细胞层。

5.洗细胞主要是洗去分离液，所以不能省去。

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